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细胞转染,细胞转染的方法和基本原理

一:

细胞转染技术百科

问题1:悬浮细胞的转染怎么做
细胞转染答:jinghuanlv认为:悬浮细胞和贴壁细胞转染还是有很大不同的。脂质体转染的原理基于电荷吸引原理,先形成脂质体-DNA复合物,散布在细胞周围,然后通过细胞的内吞作用,将目的基因导入细胞内,而脂质体复合物与贴壁细胞的接触机会比。

问题2:细胞转化和转染的区别
答:转化是对于细菌来说是用CaCl2处理使其细胞膜通透性增加使质粒可以进入转染是对于细胞来说是用病毒脂质体或者电击的方法将质粒转入细胞内。

问题3:细胞转染需要什么试剂
细胞转染答:试剂方面,大致下面三个组分。DNA转染试剂制备复合物需要的基础培养基或者150mM氯化钠溶液。

问题4:细胞转染后,再培养7或8天收集细胞,那么长时间,细胞不就挤死了吗_百度
答:细胞转染可以:(1)真核细胞可以掺入外源DNA而获得新的遗传标志;(2)应用于转基因动植物;(3)应用于生物制药、基因治疗、RNA干扰。脂质体介导法实验原理上图所示是脂质体介导转染的示意图,它显示了外源质粒进入细胞。

问题5:HEK-293T细胞的电转染实验条件
细胞转染答:使用Entranster-E电转液与指数衰减脉冲电转仪时HEK-293T细胞的电转染条件是:对于04cm电转杯,细胞密度为5x10^6cells/ml,DNA用量为5μg,电转液体积为250μl,电压为250V,电容为950μF。

问题6:细胞转染是孵育的目的是什么什么
答:DNA与转染试剂孵育的目的:DNA和转染试剂结合形成DNA-转染剂复合物。DNA-转染剂复合物与细胞孵育的目的:细胞吸收DNA-转染剂复合物,进而DNA进入细胞。

问题7:细胞共转染实验的详细步骤求助
答:一般细胞转染可以分开转染也可以共同转染,就看你们课题组的选择了。我们课题组遇到需要干扰两个基因的时候都选择用RFECE,SIRNA技术分开转染,弊端就是开支会比共同干扰要高,这个也要看你们课题组的经费情况。

问题8:细胞转染,挑单克隆
答:无限稀释法,就是铺到96板的一个孔,然后倍数稀释下去,到最后就会有一个细胞的孔,还有就是细胞计数,然后再铺96孔,也会出现一个细胞,但是对于挑单克隆来说,我觉得没必要单个细胞,单个细胞也不容易长起来,虽然挑克隆。

问题9:为什么原代培养的细胞难转染?适合原代细胞转染的方法有哪些?
细胞转染答:对原代培养的细胞,可以采用一下方法:非病毒载体,选择比较好的转染试剂,推荐QIAGEN的superfect转染试剂,对原代细胞还可以。采用电转。理论上任何细胞都可以通过电转,不足之处:需要电转仪器,缓冲液非常有讲究,不同细胞。

问题10:哪种细胞转染效率较高
答:个人经验,BHK、CHO是很常用的转染用细胞,而且跟抗体非特异性反应也不高。一般来说,大多数可传代细胞的转染效率都是可以的,还要考虑所用转染剂的类型。不建议你用MDCK细胞,非常难转染。

二:

细胞转染技术资料

问题1:THP-1细胞电转染实验条件
答:使用Entranster-E电转液与指数衰减脉冲电转仪时THP-1细胞的电转染条件是:对于02cm电转杯,细胞密度为10x10^6cells/ml,DNA用量为2μg,电转液体积为100μl,电压为140V,电容为950μF。对于04cm电转杯。

问题2:悬浮细胞转染步骤及优化注意事项
答:悬浮细胞转染通常可能遇到:1效率明显低于贴壁细胞2细胞不易培养,死亡率高3转染试剂毒性大,细胞死亡加剧这三种问题,为了提高悬浮细胞的转染效率,可以使用毒性较小的非脂质体的转染试剂,也可以使用电转染。

问题3:把质粒转入细胞的方法步骤是什么啊请教一下
答:要看你是什么细胞,是想过表达还是knockdown一个基因,稳转还是瞬转。细胞转染是指将外源分子如DNA,RNA等导入真核细胞的技术。随着分子生物学和细胞生物学研究的不断发展,转染已经成为研究和控制真核细胞基因功能的常规工具。

问题4:不同细胞siRNA转染效率的检测问题
答:博凌科为解答:1通常情况下悬浮细胞转染效率较低,贴壁细胞的转染效率因细胞不同,有些很高有些很低。HepG2的DNA转染效率大概有50%,siRNA暂时没做过。如果你有GFP质粒和针对GFP的siRNA共转染,用只转染GFP质粒的孔做。

问题5:HEPG2细胞转染实验
细胞转染答:一般实验设置实验空白组,实验组和阴性对照组,筛选的药物一定是对干扰组有作用,但是对NC组没有影响的,不然结果就不好分析了,楼主是不是弄反了?我们课题组一般是用RFECT方法,用的合成公司的siRNA,一般都是要在NC组。

问题6:3T3-L1细胞转染
答:无论你用什么试剂,实验环境多好都是没用的。细胞的状态是首先要考虑的,再去考虑其他。试剂对实验的结果影响也不小,我们实验室刚开始做hela细胞转染的时候用Lipo发现细胞毒性有点大,听了其他实验室同学的介绍换了RFECT。

问题7:THP-1细胞转染
答:广州中山大学附属肿瘤医院成功转染THP-1(人单核白血病细胞)悬浮细胞;出色的细胞转染结果与您分享;24小时荧光图片:。

问题8:如何让一个细胞过度表达某种基因,来观察此基因的作用,瞬时转染和稳定转
答:一般转染的质粒除了带有需要过表达的基因以外,还需要带有标记基因。标记基因可以被特定的抗体检测,从而判断是否有效表达。如果你要过表达的是某种蛋白,也可以直接通过该蛋白的抗体检测,对照是没有转染的同种细胞,这样表达。

问题9:病毒为什么要包装后才能转染细胞
细胞转染答:包装病毒转染细胞是为了提高转染效率。你拿包装病毒的质粒去转染细胞,和转染普通质粒的效率没什么区别。

问题10:细胞培养及转染Protocol
答:(二)细胞传代步骤:(一)细胞冻存6、注意事项:实验四转染(1)胰酶消化细胞并计数,接种至100mm培养皿中,使其在转染日密度为60%-70。底面积为100mm的细胞培养皿,每个皿内最大容量加入240μg质粒DNA,用。

三 :

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